液相色譜是一類分離與分析技術(shù)，其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中，為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

在操作高效液相色譜時(shí)：

有沒有為老是出現(xiàn)氣泡而崩潰？

有沒有為超聲波震蕩了一個(gè)小時(shí)，流動(dòng)相還出現(xiàn)氣泡而暈倒？

有沒有為天氣晴好時(shí)沒出現(xiàn)氣泡，陰天、下雨天同一瓶出現(xiàn)氣泡而火大？

如果在操作高效液相色譜時(shí)，流動(dòng)相出現(xiàn)了氣泡，那就等于整個(gè)工作進(jìn)行不下去了。

? 超聲波震蕩了一個(gè)小時(shí)的流動(dòng)相，為什么天氣晴好的時(shí)候沒出現(xiàn)氣泡，陰天、下雨天就會(huì)出現(xiàn)？

是因?yàn)殛幪臁⑾掠晏炜諝鈿鈮合陆担鹑茉诹鲃?dòng)相中的空氣過飽和(晴天時(shí)氣壓高還沒飽和)，當(dāng)高壓泵抽取流動(dòng)相時(shí)，空氣析出，產(chǎn)生了氣泡。

? 超聲波震蕩了一個(gè)小時(shí)的流動(dòng)相，為什么里面還有空氣呢？

這是由于在常壓下震蕩，驅(qū)趕空氣效果不行。如果把裝流動(dòng)相的瓶子進(jìn)行抽真空，同時(shí)進(jìn)行超聲波震蕩，效果會(huì)非常好，只要1min，流動(dòng)相中的空氣差不多沒了；經(jīng)過這樣驅(qū)逐空氣的流動(dòng)相，陰天、下雨天使用也不會(huì)出現(xiàn)氣泡了。省時(shí)，不用動(dòng)不動(dòng)半小時(shí)、一小時(shí)超聲波震蕩，效果非常好。

? 由于氣泡的存在，會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降；氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏。造成這個(gè)現(xiàn)象的主因有以下幾條：

一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；

二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；

三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣。

? 液相色譜儀在使用中，整個(gè)液路系統(tǒng)有兩個(gè)地方易產(chǎn)生氣泡：

1、泵頭吸液白管；

2、檢測(cè)口流通池。

? 氣泡產(chǎn)生的原因

溫度上升，壓力下降。溫度上升或柱溫上升，當(dāng)接近試劑沸點(diǎn)時(shí)，試劑汽化產(chǎn)生氣泡，試劑中已含微小氣泡，因加熱變大而產(chǎn)生氣泡。壓力下降產(chǎn)生氣泡，流動(dòng)相中一直包含微小氣泡，無論超聲過濾，均不能徹底去掉它，那么當(dāng)壓力下降時(shí)，微小氣泡將長(zhǎng)大，且多個(gè)小氣泡易聚集成大氣泡，從而影響正常實(shí)驗(yàn)。

氣泡產(chǎn)生的原因及解決方法

? 泵頭及吸液白管

1、泵頭

泵頭是壓力變化最劇烈的地方，也是最易產(chǎn)生氣泡的地方。泵頭靠負(fù)壓而吸液，而負(fù)壓必然使流動(dòng)相中的小氣泡長(zhǎng)大，當(dāng)泵腔變正壓時(shí)，已長(zhǎng)大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路，則泵腔內(nèi)將積存氣泡，從而影響吸液精度。鑒于此，泵頭上專門設(shè)計(jì)了排氣閥，便于泵頭排氣，觀察柱壓穩(wěn)定了說明泵頭排氣成功。

2、吸液白管長(zhǎng)氣泡

(1)吸液白管接觸空氣部位漏氣，產(chǎn)生可見氣泡。

吸液白管是常壓和負(fù)壓交臂變化部位，其漏表現(xiàn)為大氣進(jìn)入白管內(nèi)，而不易見到管內(nèi)液體漏出。

處理方法：更換白管。

(2)濾頭堵

濾頭堵使得液體流入濾頭的速度下降，泵強(qiáng)制吸液而產(chǎn)生真空氣泡。

判斷：拔掉濾頭不再長(zhǎng)氣泡則是濾頭堵。

處理方法：

a、30%硝酸水液超洗濾頭，20分鐘左右。

b、水超洗濾頭，注意換水多超幾次。

c、流動(dòng)相汽化產(chǎn)生氣泡。尤其是夏天室溫高，沸點(diǎn)低的試劑易汽化，比如：乙酸，乙醚，氨水，石油醚等易于汽化。處理方法：超聲，降室溫。

? 檢測(cè)流通池長(zhǎng)氣泡

流通池是易積存氣泡的地方，其對(duì)基線影響巨大，流動(dòng)相流入色譜柱后，壓力越來越小，微小氣泡將逐漸長(zhǎng)大，而流通池截面積遠(yuǎn)大于鋼管面積，則氣泡在池內(nèi)易長(zhǎng)大，氣泡的特點(diǎn)是長(zhǎng)大在無外壓的情況下，很難縮小到鋼管內(nèi)經(jīng)以下流出流通池，所以它就存在了池內(nèi)。

處理方法：

1、對(duì)于示差檢測(cè)器(示差檢測(cè)器池只能耐幾個(gè)公斤壓力)，只能是反復(fù)沖洗斥資，舉高廢液瓶靠廢液管內(nèi)液柱給池加一個(gè)微小反壓，所以這就造成了示差池子排氣困難些，但無它法。為了避免這類問題的出現(xiàn)，液相色譜實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。

常用的脫氣方法有以下幾種：

a、吹氦脫氣法

使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動(dòng)相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國(guó)內(nèi)因氦氣價(jià)格較貴，本法使用較少。

b、加熱回流法

此法的脫氣效果較好。

c、抽真空脫氣法

此時(shí)可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會(huì)引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對(duì)多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進(jìn)行混合，以保證混合后的比例不變。

d、超聲波脫氣法

它是目前實(shí)驗(yàn)室使用最廣泛的脫氣方法，將配制好的流動(dòng)相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡(jiǎn)便，基本能滿足日常分析的要求。

e、在線真空脫氣法

把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲(chǔ)液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實(shí)現(xiàn)了流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

2、在液相色譜系統(tǒng)開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。

3、在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。